琼脂糖凝胶4B
来源:原创
编辑:administrator
时间:2015-03-09 17:18
琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒,作为凝胶层析介质使用。
凝胶性质
凝胶应用
本产品为传统的琼脂糖介质,非特异性吸附低,回收率高,可多次重复使用等特点,用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。下面简要介绍介质的使用过程。
1、装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
⑵选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。匀浆作脱气处理。不要剧烈搅动,以免搅坏微球。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑸打开蠕动泵,让缓冲液缓慢流过,使柱床稳定。
⑹最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
2、平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3、上样
⑴样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
⑶上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
4、洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5、再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
6、注意:在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。
7、 贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。
凝胶性质
项 目 | 指 标 |
基质 | 4%琼脂糖凝胶 |
排阻极限 | 60000~20×106 (球蛋白) |
形状 | 球型 |
粒径 | 45~165 μm |
最高流速 | 11.5 cm/h* |
耐压 | 0.008 MPa |
耐热 | pH7水中45℃24h |
pH适用范围 | 4~9 (长时间), 3~11(短时间,在位清洗) |
化学稳定性 | 可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍 |
本产品为传统的琼脂糖介质,非特异性吸附低,回收率高,可多次重复使用等特点,用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。下面简要介绍介质的使用过程。
1、装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
⑵选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。匀浆作脱气处理。不要剧烈搅动,以免搅坏微球。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑸打开蠕动泵,让缓冲液缓慢流过,使柱床稳定。
⑹最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
2、平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3、上样
⑴样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
⑶上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
4、洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5、再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
6、注意:在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。
7、 贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。
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